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凍存細胞的復蘇:
1、液氮罐中取出凍存管,確認凍存管標簽,37℃水浴,避免水沒過管帽,持續搖動, 1分鐘內即可融化。(注意液氮中取出后,避免長時間暴露于常溫,或令其緩慢回溫,此舉可致細胞死亡率嚴重增加)。
2、凍存管內細胞懸液轉移入離心管,以5ml/min(通常凍存管為2ml體系,則在半分鐘左右再加入2ml培養基)的速度緩慢加入培養基,開始時逐滴加入,隨后可漸加快,逐步稀釋細胞和DMSO。
3、一定轉速離心10min,去上清液;
4、培養基重新懸浮細胞沉淀,接種細胞至培養瓶;
5、24h后觀察并確認細胞貼壁;
6、定期更換培養液,直至細胞系重新建立。
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